细胞株的污染鉴定、预防和处理问题介绍

 普通微生物污染：培养基浑浊，高倍镜观察有微生物污染；按规定弃用并全面严格灭菌。

 支原体污染：显微镜无法观察，依经验表现为细胞生长缓慢，有细胞漂浮等等，应通过PCR 等方法鉴定，如发现支原体污染，应按规定弃用，实验室要及时全面消毒灭菌，防止蔓延。（有些常规性细胞学实验不受支原体污染影响，可以继续使用细胞传代，为防污染扩大蔓延，可以选择性的在培养基中加入高效价的其它种抗生素，并在隔离实验室操作和独立使用一切用具与培养基等）。

 支原体污染检测：支原体污染在细胞培养中最常见、不易被查觉，但支原体污染可显著影响细胞功能干扰实验结果。支原体是介于细菌和病毒之间的目前所知能独立生活的最小微生物，它无细胞壁，形态呈高度多形性，最小直径0.2um，可通过滤器。 目前通过对国内100余株/系细胞的检测，形势不容乐观。污染率达30% ~ 60% 。课题组从国外引进细胞株/系也经常出现支原体的污染。支原体在污染细胞后，它通过影响细胞的DNA、RNA 的合成及急速消耗培养基中的氨基酸来抑制细胞的生长，并能降低细胞的融合率。因此，在运用各种细胞系进行实验研究时，首先要证明所用细胞有无支原体的污染。支原体污染后，培养基不发生浑浊，细胞病变轻微或不明显，因此难以发现。目前，支原体检测的方法有以下几种：（a）相差显微镜观察；（b）低张处理地衣红染色法；（c）荧光染色法；（d）酶标法；（e）PCR法（优点：灵敏度高，检测耗时短，样品量小，只需50ul细胞培养用液上清；缺点：引物及制剂费用较高）。